كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء

الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (أو الكروماتوغرافيا السائلة عالية الضغط ، هي شكل من أشكال الفصل الكروماتوغرافي العمودي يستخدم كثيرا في الكيمياء الحيوية والكيمياء التحليلية للفصل ، وتحديد ، وقياس المركبات على أساس الاستقطابات التمييزية والتفاعل مع المرحلة ثابتة للعمود . تستخدم الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء أنواع مختلفة من المراحل (عادة ، مسعور المشبعة سلاسل الكربون) ، والمضخة التي تتحرك في المرحلة المتنقلة (ق) وتحليلها من خلال العمود ، وكشف عن أن يوفر charateristic الاحتفاظ الوقت لتحليلها. وكشف أيضا أن تقدم أي معلومات أخرى characterisitc (أي فوق البنفسجية / فيس البيانات الطيفية لتحليلها إذا كان الأمر كذلك مجهزة). الوقت الاحتفاظ تحليلها يختلف اعتمادا على قوة تفاعلاته مع مرحلة ثابتة ، ونسبة / تكوين المذيبات المستخدمة ، ومعدل تدفق للمرحلة المتنقلة.

مع الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء توفر المضخة (بدلا من الجاذبية الأرضية) الضغط العالي المطلوب ليدفع المرحلة النقالة وتحليلها من خلال العمود المكتظ. وزادت كثافة ينشأ من جسيمات أصغر حجما. هذا يسمح للفصل بشكل أفضل على أعمدة أقصر من طول عند مقارنة اللوني العادية العمود.

العملية

جهاز الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء.

تدخل العينة المراد تحليلها في الحجم الصغير لتيار من مرحلة المتنقلة. وتبطأ حركة العينة خلال العمود بواسطة مادة كيميائية معينة أو التفاعلات الجسدية مع المرحلة ثابتة لأنها تقطع على طول العمود. كم هو تحليلها تباطأ يتوقف على طبيعة وتحليلها على تركيبات من المراحل الثابتة والمتحركة. في الوقت الذي يكون فيه elutes محددة تحليلها (يخرج من نهاية العمود) ويسمى في الوقت الاحتفاظ بهم ؛ الوقت الاحتفاظ في ظل ظروف معينة تعتبر معقولة تحديد الخصائص الفريدة لتحليلها معين. استخدام أصغر حجم الجسيمات العمود التعبئة (أعلى مما يخلق backpressure) يزيد من سرعة الخطي يعطي وقتا أقل لمكونات منتشر داخل عمود ، مما أدى إلى تحسن في القرار chromatogram الناتجة عن ذلك. المذيبات المستخدمة ليالي عام يشمل أي اختلاط مزيج من الماء أو السوائل العضوية المختلفة (والأكثر شيوعا هي الميثانول والأسيتونيتريل). المياه قد تحتوي على أملاح أو مخازن للمساعدة في فصل المكونات تحليلها ، أو مركبات مثل حامض trifluoroacetic الذي يعمل بمثابة عامل ايون الاقتران.

وهناك مزيد من الصقل للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء قد تتفاوت من مرحلة التكوين النقال أثناء التحليل ، وهذا ما يعرف باسم عملية الاستخراج الانحدار. والتدرج اللوني العادي لعكس المرحلة قد تبدأ في 5 ٪ الميثانول وتقدم خطيا إلى 50 ٪ الميثانول أكثر من 25 دقائق ، والتدرج يتوقف على كيفية اختيار مسعور وتحليلها هو. التدرج يفصل الخلائط تحليلها بوصفها وظيفة للتقارب في تحليلها لتكوين النقالة المرحلة الحالية بالنسبة للمرحلة ثابتة. هذا التقسيم هو عملية مماثلة لتلك التي تحدث أثناء استخراج السائل السائل بل هو مستمر ، وليس خطوة حكيمة. في هذا المثال ، وذلك باستخدام المياه / الانحدار والميثانول ، وستكون العناصر الأكثر تنافرا مع الماء أزل (تأتي قبالة العمود) عندما المرحلة متنقلة تتألف في معظمها من مادة الميثانول (إعطاء المرحلة نسبيا مسعور المحمول). لمزيد من المركبات المائية ، وسوف أزل في ظل ظروف من الميثانول منخفضة نسبيا / المياه العالية.

اختيار المذيبات والمواد المضافة ومتدرجة تعتمد على طبيعة المرحلة ثابتة وتحليلها. في كثير من الأحيان لسلسلة من الاختبارات التي أجريت على تحليلها وعدد من يدير المحاكمة قد تتم معالجتها من أجل العثور على طريقة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء الذي يعطي أفضل فصل الذرى.

الأنواع

الكروماتوغرافيا المقسمة

وقال تقرير حديث الوارد الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء. في هذه الصورة ؛ لاجيلنت 1200 بكمبيوتر

الكروماتوغرافيا المقسمة هي أول نوع من الكروماتوغرافيا التي طورها الكيميائيين . معامل القسم المبدأ لم يطبق في اللوني للورق ، طبقة رقيقة اللوني ، وتطبيقات المرحلة الغاز السائل السائل. عام 1952 جائزة نوبل في الكيمياء والتي حصل عليها آرتشر جون بورتر وريتشارد مارتن لورنس ميلنغتون سينج لتطوير هذه التقنية ، التي كانت تستخدم لفصلهم من الأحماض الأمينية. التقسيم اللوني يستخدم الاحتفاظ المذيبات ، على السطح ، أو داخل أو ألياف الحبوب من الخاملة "" مصفوفة دعم متين كما هو الحال مع اللوني للورق ، أو يستفيد من بعض coulombic إضافية و / أو هيدروجين التفاعل مع دعم قوي. الجزيئات وازن (قسم) بين مرحلة ثابتة السائلة وeluent. المعروف Hydrophilic التفاعل اللوني (HILIC) في الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ، يفصل هذا الأسلوب analytes على أساس الاختلافات القطبية. HILIC في معظم الأحيان يستخدم المستعبدين القطبية مرحلة ثابتة وغير القطبية ، واختلاط المياه ، مرحلة الجوالة. قسم الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء قد استخدمت تاريخيا على السيليكا unbonded أو يدعم الألومينا. كل يعمل بشكل فعال لفصل analytes بسبب الخلافات القطبي النسبي ، ومع ذلك ، HILIC في الاستفادة من فصل الحمضية والأساسية ومحايدة المواد المذابة في chromatogram واحدة.

وanalytes القطبية منتشرة في طبقة ثابتة المياه المرتبطة بالمرحلة ثابتة القطبية وبالتالي الاحتفاظ بها. استبقاء القوة مع زيادة الاستقطاب المتزايد تحليلها ، والتفاعل بين قطبي تحليلها ومرحلة القطبية ثابتة (نسبة إلى مرحلة المحمول) يزيد من الوقت عملية الاستخراج. قوة التفاعل يعتمد على المجموعات الوظيفية في الجزيء تحليلها التي تشجع على التقسيم ولكن يمكن أن تشمل أيضا coulombic (كهرباء) التفاعل والقدرة للهيدروجين. استخدام المذيبات القطبية أكثر في المرحلة المحمول سيقلل من الوقت الإبقاء على analytes ، في حين أن أكثر المذيبات مسعور تميل إلى زيادة مرات الاحتفاظ به.

والتقسيم التي أرستها - الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء قد انخفض من صالح في 1970s مع تطور عكس المرحلة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء بسبب نقص في إمكانية تكرار مرات الاحتفاظ مثل الماء أو المذيبات العضوية بروتيتش تغيرت حالة الماء من السليكا أو الألومينا وسائل الاعلام الكروماتوجرافى. في الآونة الأخيرة فقد أصبح من المفيد مرة أخرى مع تطور مراحل HILIC الرهينة الذي تحسين التكاثر.

كروماتوغرافيا المرحلة العادية

For more details on this topic, see aqueous normal phase chromatography.

المعروف أيضا باسم عادي المرحلة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (أرستها - الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء) ، أو امتزاز اللوني ، يفصل هذا الأسلوب analytes استنادا إلى امتزاز الكيمياء ثابتة من المياه السطحية والاستقطاب. انها واحدة من الأنواع الأولى من الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ان كيميائيين المتقدمة. أرستها - يستخدم الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء مرحلة القطبية ثابتة وغير القطبية ، وغير مائي مرحلة الجوالة ، ويعمل بشكل فعال لفصل analytes يذوب بسهولة في المذيبات غير القطبية. وتحليلها مع شركاء ويتم الاحتفاظ بها في المرحلة ثابتة القطبية. الامتزاز القوة مع زيادة الاستقطاب المتزايد تحليلها ، والتفاعل بين قطبي تحليلها ومرحلة القطبية ثابتة (نسبة إلى مرحلة المحمول) يزيد من الوقت عملية الاستخراج. قوة التفاعل لا يتوقف فقط على المجموعات الوظيفية في الجزيء تحليلها ، ولكن أيضا على عوامل الفراغية. أثر sterics على قوة التفاعل يسمح هذا الأسلوب لحل (مستقل) الهيكلي ايزومير s.

استخدام المذيبات القطبية أكثر في المرحلة المحمول سيقلل من الوقت الإبقاء على analytes ، في حين أن أكثر المذيبات مسعور تميل إلى زيادة مرات الاحتفاظ به. جدا المذيبات القطبية في خليط تميل إلى إلغاء المرحلة ثابتة من خلال خلق طبقة المياه ملزمة ثابتة على سطح ثابت المرحلة. هذا السلوك غريبة نوعا ما إلى مرحلة طبيعية لأنها هي الأكثر محض آلية امتزاز (من التفاعلات مع سطح صلب بدلا من طبقة ناعمة على السطح).

أرستها - الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء فقد الحظوة في 1970s مع تطور عكس المرحلة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء بسبب نقص في إمكانية تكرار مرات الاحتفاظ مثل الماء أو المذيبات العضوية بروتيتش تغيرت حالة الماء من السليكا أو الألومينا وسائل الاعلام الكروماتوجرافى. في الآونة الأخيرة فقد أصبح من المفيد مرة أخرى مع تطور مراحل HILIC الرهينة الذي تحسين التكاثر.

كروماتوغرافيا الإحلال

المبدأ الأساسي كروماتوغرافيا الإحلالهو : جزيء مع ارتفاع النسب لمصفوفة اللوني (في المحل) وسوف تنافس بفعالية لمواقع ملزمة ، وبالتالي إزاحة الجزيئات مع جميع الانتماءات أقل. هناك اختلافات واضحة بين التشرد واللوني عملية الاستخراج. في وضع عملية الاستخراج والمؤثرات عادة ما تنشأ من عمود في الاعالي ، وغاوسي الضيقة. فصل واسع من القمم ، ويفضل أن خط الأساس ، هو المطلوب من أجل تحقيق الحد الأقصى لتنقية المياه. السرعة التي يتم بها أي مكون من خليط يسافر أسفل العمود في وضع عملية الاستخراج يعتمد على عوامل كثيرة. ولكن بالنسبة لاثنين من المواد السفر بسرعات مختلفة ، وبالتالي يمكن حلها ، يجب أن تكون هناك اختلافات كبيرة في بعض التفاعل بين الجزيئات الحيوية والمصفوفة اللوني. معلمات التشغيل يتم تعديلها إلى أقصى حد من تأثير هذا الاختلاف. في كثير من الحالات ، خط أساس الفصل بين قمم يمكن أن يتحقق إلا مع عملية الاستخراج الانحدار والحمولات العمود منخفضة. وبالتالي ، واثنين من المآخذ على وضع عملية الاستخراج اللوني ، وبخاصة على نطاق وإعدادي ، وتعقيد العمليات ، وذلك بسبب الانحدار المذيبات الضخ ، والإنتاجية المنخفضة ، وذلك بسبب انخفاض الشحنات العمود. التشرد اللوني للمزايا مقارنة اللوني عملية الاستخراج في أن يتم حل المكونات إلى مناطق متتالية من مواد نقية بدلا من "القمم". لأن عملية يستفيد من غير خطية من الأيسوثرم ، وهو أكبر العمود تغذية يمكن فصلها عن عمود معطى مع مكونات المنقى تعافى بتركيزات أعلى بكثير.

مرحلة عكس الكروماتوغرافيا

وchromatogram من خليط معقد (العطور المياه) التي حصلت عليها المرحلة عكس الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء

For more details on this topic, see Reversed-phase chromatography.

مرحلة عكس الكروماتوغرافيا (البرنامج العادي للجنة الحماية من الإشعاع أو الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء) لديه غير ثابتة المرحلة القطبية والمائية ، ومعتدل القطبية مرحلة الجوالة. واحد مشترك هو مرحلة ثابتة السيليكا التي تم التعامل معها RMe ₂ SiCl ، حيث صاد هي سلسلة متتالية مجموعة ألكيل مثل جيم ₁₈ ح ₃₇ ج ₈ أو ₁₇ ه. مع هذه المراحل ثابتة ، والاحتفاظ وقت أطول للجزيئات التي هي أكثر المنظمات غير القطبية ، في حين أن الجزيئات القطبية أزل بسهولة أكبر. محقق يمكن أن تزيد من الاحتفاظ الوقت عن طريق إضافة المزيد من المياه إلى مرحلة المتنقلة ؛ مما يجعل التقارب من المادة المحللة مسعور للمرحلة ثابتة مسعور أقوى بالنسبة إلى المرحلة الآن أكثر ماء المحمول. وبالمثل ، يمكن للمحقق نقصان الوقت الاحتفاظ بإضافة مزيد من عضوية مذيبة للeluent. جنة الحماية من الإشعاع هو أن ذلك يشيع استخدامها بشكل غير صحيح أنه كثيرا ما يشار اليه باسم "الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء" دون مزيد من التحديد. صناعة الأدوية بانتظام ويستخدم جنة الحماية من الإشعاع في التأهل الأدوية قبل الإفراج عنهم.

جنة الحماية من الإشعاع وتعمل على مبدأ القوات مسعور ، والتي تنبع من التماثل عالية في هيكل ثنائي القطب المياه ولعب دور أهم في جميع العمليات في مجال علوم الحياة. السماح للجنة الحماية من الإشعاع هو قياس هذه القوات التفاعلية. والملزمة لتحليلها للمرحلة ثابتة تتناسب مع منطقة الاحتكاك السطحي حول الجزء غير القطبية للجزيء عند تحليلها بالتعاون مع يغند في eluent مائي. بهذا المعنى solvophobic تهيمن عليه قوة من المياه ل"تخفيض التجويف" حول تحليلها وسلسلة جيم ₁₈ - مقابل المعقدة على حد سواء. الطاقة المنبعثة في هذه العملية بما يتناسب مع التوتر السطحي للeluent (المياه : 7.3 × 10 ^-6 جول / سم ² ، والميثانول : 2.2 × 10 ^-6 جول / سم مربع) والى السطح مسعور لتحليلها ويغند على التوالي . ويمكن أن يكون الاحتفاظ بنسبة أقل إضافة المذيبات القطبية (الميثانول ، الأسيتونيتريل) في المرحلة المحمول لخفض التوتر السطحي للماء. التدرج عملية الاستخراج يستخدم هذا التأثير تلقائيا عن طريق الحد من الاستقطاب والتوتر السطحي للمرحلة النقالة المائية في أثناء التحليل.

الخصائص الهيكلية للجزيء تحليلها تلعب دورا هاما في خصائصها الاحتفاظ به. بصفة عامة ، وتحليلها مع أكبر منطقة مسعور السطح (الميثان ، وتغير المناخ ، وبصفة عامة غير القطبية السندات ذرية ، مثل قوات الأمن الخاصة ، وغيرها) النتائج وقتا أطول في الاحتفاظ لأنه يزيد من الجزيء غير القطبية مساحة السطح ، والتي هي غير - التفاعل مع هيكل المياه. من ناحية أخرى ، والمجموعات القطبية ، مثل أوهايو ، بولاية نيو هامبشير ₂ ، ^{سجع --} أو بولاية نيو _{هامبشير} ³ + تقليل الاحتفاظ لأنها تندمج بشكل جيد في الماء. جزيئات كبيرة جدا ، ومع ذلك ، يمكن أن يؤدي إلى عدم اكتمال التفاعل بين سطح تحليلها كبيرة ويجند لسلاسل ألكيل ويمكن أن يكون لها مشاكل دخول المسام للمرحلة ثابتة.

زيادات الوقت مع الاحتفاظ مسعور (غير القطبية) مساحة السطح. تفرعت سلسلة مركبات أزل بسرعة أكبر من ايزومرات خطية المقابلة لأن المساحة الإجمالية قد انخفضت. وبالمثل المركبات العضوية مع نسخة واحدة على سندات أزل في وقت لاحق من تلك التي مع جيم = ج ج ج السندات أو ثلاثة أضعاف ، كما أن السندات ضعفين أو ثلاثة أضعاف هو أقصر من نسخة واحدة السندات.

جانبا من المحمول سطح مرحلة التوتر (القوة التنظيمية في هيكل eluent) ، وغيرها من المعدلات المرحلة المحمولة يمكن أن تؤثر على الاحتفاظ تحليلها. على سبيل المثال ، إضافة أملاح غير عضوية أسباب زيادة معتدلة في خطي التوتر السطحي للمحاليل مائية (ca. 1.5 × 10 ^-7 جول / سم مربع في مول لكلوريد الصوديوم ، 2.5 × 10 ^-7 جول / سم مربع في مول ل(نيو هامبشاير _{4) 2 حتى 4)} ، ولأن الكون من تحليلها واجهة المذيبات يسيطر عليه التوتر السطحي ، و بالإضافة إلى الأملاح تميل إلى زيادة الوقت الاحتفاظ. هذه التقنية المستخدمة في فصل معتدل والانتعاش من البروتينات وحمايتها من حيث النشاط البيولوجي في تحليل البروتين (مسعور التفاعل اللوني ، الائتلاف).

عنصر هام آخر هو تأثير الرقم الهيدروجيني لأن هذا يمكن أن يغير hydrophobicity لتحليلها. لهذا السبب معظم طرق استخدام وكيل التخزين المؤقت ، مثل فوسفات الصوديوم ، للسيطرة على الرقم الهيدروجيني. مخازن تخدم أغراضا متعددة : فهي السيطرة الرقم الهيدروجيني ، وتحييد هذه التهمة على أي المتبقية تتعرض السيليكا في المرحلة ثابتة ، وتقوم بدور ايون الإقران وكلاء لتحييد المسؤول عن تحليلها. فورمات أمونيوم المضافة هو شائع في قياس الطيف الكتلي لتحسين الكشف عن analytes معينة من خلال تشكيل adducts الأمونيوم. وحمض العضوية المتطايرة مثل حامض الخليك ، أو الأكثر شيوعا حامض الفورميك ، وغالبا ما يضاف إلى مرحلة المحمول اذا كان يتم استخدام الطيف الكتلي لتحليل eluent العمود. Trifluoroacetic يتم استخدام حمض نادرا في تطبيقات قياس الطيف الكتلي بسبب إصرارها على كشف ومذيب تسليم النظام ، ولكن يمكن أن تكون فعالة في تحسين استبقاء analytes مثل الأحماض الكربوكسيلية في التطبيقات باستخدام أجهزة الكشف عن الأخرى ، لأنها هي واحدة من أقوى الأحماض العضوية. آثار من الأحماض ومخازن تختلف حسب الطلب ولكن بصفة عامة تحسين اللوني.

أعمدة المرحلة عكس إلى حد بعيد يصعب على الضرر بالمقارنة مع الأعمدة السيليكا العادي ، إلا أن العديد من الأعمدة المرحلة عكس ألكيل تتكون من جزيئات السيليكا derivatized ويجب ألا تستخدم أبدا مع قواعد المائية كما سيتم تدمير هذه الكامنة السيليكا الجسيمات. ويمكن استخدامها مع حمض مائي ، ولكن العمود يجب ألا تتعرض للحمض لفترة طويلة جدا ، لأنها يمكن أن تتآكل الأجزاء المعدنية للمعدات الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء. وينبغي أن البرنامج العادي للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء الأعمدة سيتم مسح مع مذيب نظيفة بعد الاستخدام لإزالة الأحماض المتبقية أو مخازن ، وتخزينها في تكوين مناسب من المذيبات. المحتوى المعدني للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء الأعمدة يجب أن تظل منخفضة إذا كانت قدرة على أفضل وجه ممكن للمواد منفصلة إلى الاحتفاظ بها. اختبارا جيدا للالمحتوى المعدني للعمود هو لحقن عينة التي هي مزيج من 2،2 '-- و4،4' -- bipyridine. لأن 2،2 '- bipy يمكن ذو كلاب والمعادن ، وشكل ذروة ل2،2' - bipy ستكون مشوهة (الذيل) عندما أيون الفلز ق موجودة على السطح من السيليكا. ..

حجم الاستبعاد اللوني

For more details on this topic, see size exclusion chromatography.

حجم الاستبعاد اللوني (البورصة) ، المعروف أيضا باسم اللوني هلام تخلل أو هلام الترشيح اللوني ، يفصل بين الجسيمات على أساس الحجم. ومن المسلم به عموما منخفضة القرار اللوني ، وبالتالي فإنه غالبا ما تكون محجوزة لنهائي "تلميع" خطوة لتنقية. كما أنها مفيدة لتحديد هيكل وبنية التعليم العالي الرباعية لتنقية البروتينات. المجلس الأعلى للتعليم يستخدم أساسا لتحليل الجزيئات الكبيرة مثل البروتين أو البوليمرات. يعمل المجلس الأعلى للتعليم من خلال محاصرة هذه الجزيئات الصغيرة في المسام من الجسيمات. الجزيئات الكبيرة ببساطة تمريرة من المسام لأنها كبيرة جدا لدخول المسام. الجزيئات الأكبر لذلك التدفق من خلال العمود أسرع من الجزيئات الأصغر حجما ، التي هي ، من أصغر جزيء ، ويعد في الوقت الاحتفاظ به.

هذه التقنية على نطاق واسع لتحديد الوزن الجزيئي من السكريات. المجلس الأعلى للتعليم هو الأسلوب الرسمي (الذي اقترحه دستور الأدوية الأوروبي) لمقارنة الوزن الجزيئي المنخفض المختلفة المتاحة تجاريا ذات الوزن الجزيئي الهيبارين s.

اسْتِشْرابٌ بتَبادِلِ الأَيونات

For more details on this topic, see Ion exchange chromatography.

في التبادل الأيوني اللوني والاحتفاظ بها على أساس الجذب بين أيونات المذاب ، واتهم مواقع منضما إلى مرحلة ثابتة. الأيونات من التهمة نفسها مستبعدة. أنواع المبادلات الأيونية وتشمل :

• راتنجات البولي ستيرين -- وهذه تتيح الربط عبر مما يزيد من الاستقرار في السلسلة. أعلى عبر الربط يقلل تجنح ، مما يزيد من الوقت equilibration ويحسن من الانتقائية في نهاية المطاف.
• السليلوز ومبادلات الأيونات ديكستران (الجل) -- وهذه تمتلك أكبر أحجام مسام ورسوم منخفضة الكثافة مما يجعلها مناسبة لفصل البروتين.
• تسيطر الزجاج المسام مسامية أو السيليكا

بصفة عامة ، ومبادلات الأيونات صالح ملزمة من الأيونات العالي الاتهام ودائرة نصف قطرها أصغر.

زيادة في ايون مواجهة (فيما يتعلق المجموعات الوظيفية في راتنجات) تركيز يقلل من الوقت الاحتفاظ به. زيادة في درجة الحموضة يقلل من الوقت في الاحتفاظ تبادل الأيونات في حين حدوث انخفاض في درجة الحموضة يقلل من الوقت في مقابل الاحتفاظ أنيون.

هذا الشكل من أشكال اللوني على نطاق واسع في التطبيقات التالية : تنقية المياه ، وpreconcentration العناصر النزرة ، يغند تبادل اللوني ، التبادل الأيوني اللوني للبروتينات عالية الحموضة أنيون تبادل اللوني من الكربوهيدرات وoligosaccharides ، وغيرهم.

كروماتوغرافيا الانجذاب البيولوجي

تعتمد العملية الكروماتوجرافية على ملكية المواد النشطة حيويا على شكل مجمعات مستقرة، ومحددة ، وقابلة للإنعكاس. تشكيل هذه المجمعات ينطوي على مشاركة قوات الجزيئية المشتركة مثل فان دير فال التفاعل ، والتفاعل الكهربائي ، ثنائي القطب تفاعل ثنائي القطب ، والتفاعل مسعور ، والسندات الهيدروجين. يتسم بالكفاءة والسندات biospecific تتشكل من العمل المتزامن ومتضافرة لعدد من هذه القوات في مواقع الربط مكملة.

الكروماتوغرافيا المائية الطبيعيى

الكروماتوغرافيا المائية الطبيعيية هي تقنية كروماتوجرافية تشمل المرحلة المتنقلة بين كروماتوغرافيا منطقة عكس المرحلة اللوني و الكروماتوغرافيا العضوية العادية . هذه التقنية المستخدمة لتحقيق الانتقائية فريدة من نوعها للمجمعات للماء ، والتي تبين عملية الاستخراج المرحلة العادية باستخدام عكس المذيبات المرحلة.

التدفق المستمر وانحدار عملية الاستخراج

يسمى الفصل الذي تبقي فيه تكوين مرحلة التنقل ثابتا خلال الإجرائات يسمى isocratic (معنى التكوين المستمر). والكلمة صاغها تشابا هورفاث من جامعة ييل ، الذي كان واحدا من رواد الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء.

و ليس من الضروري ان تظل تكوين مرحلة التنقل ثابتة. وفصل فيه المحمول مرحلة تكوين يتم تغيير أثناء عملية فصل يوصف بأنه عملية الاستخراج الانحدار. مثال واحد هو التدرج ابتداء من الساعة 10 ٪ الميثانول وتنتهي في 90 ٪ الميثانول بعد 20 دقيقة. عنصرين من المرحلة المحمول وعادة ما يطلق عليه "ألف" و "باء" ، وقال هو "الضعيف" الذي يسمح للمذيب المذاب إلى أزل إلا ببطء ، بينما الثانية هي "القوية" التي المذيبات بسرعة elutes والمواد المذابة من العمود . المذيبات وغالبا ما تكون المياه ، في حين باء هو مذيب عضوي قابل للامتزاج مع الماء ، مثل الأسيتونيتريل ، والميثانول ، THF ، أو الأيسوبروبانول.

في عملية الاستخراج isocratic ، ذروة زيادة العرض مع الاحتفاظ الوقت خطيا وفقا للمعادلة لنون ، وعدد من لوحات النظرية. هذا يقودنا إلى أن العيب في وقت متأخر من قمم الإزالة الحصول على شقة واسعة جدا. الشكل والعرض قد تمنعها من الاعتراف بها قمم.

التدرج عملية الاستخراج يقلل من الاحتفاظ بها في وقت لاحق ، الإزالة المكونات بحيث أزل أسرع ، وإعطاء أضيق (وقامة) قمم بالنسبة لمعظم مكونات. هذا يحسن أيضا شكل ذروة الذرى الذيل ، كما أن التركيز المتزايد للeluent العضوية يدفع جزءا من المخلفات من ذروة إلى الأمام. هذا يزيد أيضا من ارتفاع الذروة (ذروة تبدو "أكثر وضوحا") ، وهو أمر مهم في التحليل التتبع. برنامج التدرج قد تشمل المفاجئ "خطوة" زيادة في النسبة المئوية للعنصر العضوية ، أو منحدرات مختلفة في أوقات مختلفة -- جميع وفقا لرغبة الانفصال الأمثل في الحد الأدنى من الوقت.

في عملية الاستخراج isocratic ، والانتقائية لا يتغير إذا أبعاد العمود (وطول قطرها الداخلي) تغيير -- وهذا هو ، على قمم أزل في نفس الترتيب. التدرج في عملية الاستخراج ، قد أجل التغيير عملية الاستخراج والأبعاد أو معدل تدفق التغيير.

هو القوة الدافعة ونشأت في اللوني عكس المرحلة في الترتيب رفيع من الهيكل المياه. دور المرحلة المحمول العضوية هي للحد من هذا النظام عالية عن طريق الحد من قوة تعويقية العنصر المائي.

العوامل

القطر الداخلي

القطر الداخلي لعمود الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء هو عنر مهم يؤثر على حساسية الكشف عن الانتقائية والفصل في عملية الاستخراج الانحدار. كما أنها تحدد كمية المحلول والتي يمكن تحميلها على العمود. أكبر أعمدة وعادة ما ينظر في التطبيقات الصناعية ، مثل تنقية منتج للمخدرات لاستخدامها لاحقا. المنخفضة معرف الأعمدة وتحسنت حساسية وانخفاض استهلاك المذيب على حساب قدرة التحميل.

• أكبر رقم الأعمدة (أكثر من 10 ملم) وتستخدم في تنقية كميات من المواد القابلة للاستخدام نظرا لقدرتها الكبيرة التحميل.
• التحليلية أعمدة الجدول (4.6 ملم) تم النوع الأكثر شيوعا من الأعمدة ، وإن كانت أصغر الأعمدة وسرعان ما تكتسب شعبية. فهي تستخدم في التحليل الكمي التقليدي للعينات ، وغالبا ما تستخدم الأشعة فوق البنفسجية فيس الامتصاصية كاشف.
• ضيق تحمل الأعمدة (1-2 ملم) وتستخدم للتطبيقات عند أكثر حساسية هو المطلوب إما مع الأشعة فوق البنفسجية خاصة فيما كشف والاكتشاف ومضان أو مع الكشف عن أساليب أخرى مثل اللوني السائل قياس الطيف الكتلي
• الأعمدة الشعرية (تحت 0.3 ملم) يتم استخدامها على وجه الحصر تقريبا مع الكشف عن وسائل بديلة مثل مطياف الكتلة. أنها عادة ما تكون مصنوعة من الشعيرات الدموية السليكا المصهورة ، وبدلا من الفولاذ المقاوم للصدأ الأنابيب التي توظف أكبر الأعمدة.

حجم الجسيمات

تتم الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء الأكثر تقليدية مع مرحلة ثابتة ثبتت على الجزء الخارجي من جزيئات صغيرة كروية السيليكا (حبات صغيرة جدا). هذه الجسيمات يأتي في مجموعة متنوعة الأحجام مع 5 $\mu$ الخرز م $\mu$ هو الأكثر شيوعا. جسيمات أصغر عموما توفير مزيد من المساحة السطحية وأفضل فصل ، ولكن ممارسة الضغوط اللازمة من أجل زيادة السرعة الأمثل الخطية معكوس قطرها الجسيمات التربيعية.

وهذا يعني أن المتغير للجسيمات التي هي نصف كبير ، والحفاظ على حجم العمود نفسه ، سيضاعف من الأداء ، ولكنها تزيد من الضغوط التي تتطلبها عاملا من أربع. الجزيئات الكبيرة التي تستخدم في الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء إعدادي (بأقطار العمود 5 سم تصل إلى أكثر من 30 سم) وبالنسبة لغير تطبيقات الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء مثل الصلبة مرحلة الاستخراج.

حجم المسام

العديد من المراحل التي يسهل اختراقها هي ثابتة لتوفير مزيد من المساحة السطحية. مسام صغيرة توفير قدر أكبر من المساحة السطحية في حين أن أكبر حجم المسام وتحسين الحركية ، وخاصة بالنسبة للanalytes أكبر. على سبيل المثال ، وهو البروتين الذي هو أقل من ذلك بقليل من المسام قد تدخل في المسام ولكن لا يترك بسهولة مرة واحدة في الداخل.

مضخة ضغط

تتفاوت المضخات في القدرة على الضغط ، ولكن يتم قياس الأداء وعلى قدرتها على محصول متسقة وقابلة للتكرار معدل التدفق. ضغط قد تصل إلى 40 ميجا باسكال (6000 باوند / في ²⁾ ، أو ما يقرب من 400 الاجواء. نظم الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء الحديثة قد تحسنت للعمل تحت ضغوط أعلى من ذلك بكثير ، وبالتالي فهي قادرة على استخدام الكثير من جسيمات أصغر حجما في الأعمدة (<2 $\mu$ م $\mu$ هذه "الترا الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء" أو نظم RSLC / UHPLCs يمكن أن تعمل بسرعة تصل إلى 100 ميغا باسكال (15،000 باوند / في ²) ، أو حوالي 1000 الاجواء. مصطلح "UPLC" ، وإن كان في بعض الأحيان استخدام علامة تجارية لشركة المياه وليس اسم لهذه التقنية بصفة عامة.

مصنعي الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء

• تكنولوجيا المواد المتقدمة ، وشركة
• شيمادزو الأجهزة العلمية
• اجيلنت تكنولوجيز
• بيكمان كولتر
• سيسيل الآلات.
• Dionex كورب
• هيتاشي
• PerkinElmer ، وشركة
• الحرارية فيشر العلمية
• فاريان ، وشركة
• مؤسسة المياه

مصنعي أعمدة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء وملحقاتها

• شيمادزو الأجهزة العلمية
• اجيلنت تكنولوجيز
• AkzoNobel
• بيكمان كولتر
• Dionex كورب
• ميرك كى جى اى اى Merck KGaA
• Phenomenex
• شركة سوسيتيه جنرال تحليلية للعلوم
• Shodex
• سيغما الدريخ
• الحرارية فيشر العلمية
• Tosoh المؤسسة
• فاريان ، وشركة
• مؤسسة المياه
• جريس والشركة

أنظر أيضاً

• تشابا هورفاث
• ايون اللوني

وصلات خارجية

• دليل موجز الآلات الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء -- عرض شريط فيديو يصف أجزاء مختلفة من صك الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء والدور الذي ينفذ كل
• ش الموارد ChromFAQ -- الأسئلة المتداولة حول الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء
• تمهيدي الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء -- التمهيدي المفصل مع التاريخ ، ومسرد ، والتكنولوجيا الأبواب
• الآلة الحاسبة العلمية للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء

• IEST