فهرس الملف التحليلي

نظام الـ ‏‎:API‏- وهو نظام يعمل على مبدأ فهرست الصفات التحليلية، وقد قامت بإنتاجه شركة ‏‎(bioMerieux)‎‏ الفرنسية، يستخدم نظام ‏API 20‎‏ فقط في العراق ولم يتبع نظام ‏API 32‎‏ وقد تم ‏تثبيت الاحتياج من قبل وزارتنا/دائرة بيئة بغداد لهذا النظام لاستخدامه في الفحوصات الجرثومية.‏‎ ‎ ويتكون هذا النظام من العديد من الأنظمة الفرعية كل فرع يخدم تشخيصاً بكتيرياً أو مجموعة منها ومثال ‏ذلك:‏ ‏1-‏ ‏ ‏API32E‏(لتشخيص الـEnierobacteria‏)‏ ‏2-‏ ‏ ‏API32C‏(لتشخيص الخمائرYeasts‏)‏ ‏3-‏ ‏ ‏API32A‏(لتشخيص البكتريا اللاهوائية)‏ ‏ توجد المواد الأساسية للفحوصات كمواد جافة في حجرات(‏capsule‏) موجودة على شريط عريض ‏كما موضحة في الصورة ادناه حيث تضاف البكتريا المراد فحصها إلى هذه المواد داخل الحجرات ‏وتحتضن لمدة 4-6ساعات (‏Rapid test‏) في بعض الأحيان وغالباً 24 ساعة وتقرأ النتيجة.‏

‏ ‏ وقد ادخل هذا النظام إلى المملكة الأردنية الهاشمية خلال المؤتمر الأردني الأول للطب المختبري الذي ‏عقد في عمان عام 1997 ،حيث قدمت شركة ‏bioMerieux‏ عرضاً لهذه الأجهزة وكيفية عملها ‏وعرضت منتجات اوسع لنظام الـAPI‏ حيث يحتوي 32 فحصاً بدلاً من 20 فحص، مما فتح مجالاً ‏واسعاً للدقة في مجال تشخيص أنواع كثيرة من البكتريا. حيث دخل هذا النظام إلى مديرية المختبرات ‏والنوعية عام 1999.‏ ‏ يستخدم نظام الـAPI‏ في :‏ ‏1-‏ لتشخيص البكتريا.‏ ‏2-‏ لتشخيص الفطريات.‏ ‏3-‏ فحص حساسية البكتريا للمضادات الحيوية.‏

يتكون نظام الـAPI‏ من:-‏ ‏1-‏ Hardware ‏2-‏ Software ‏3-‏ The Concumables‏ المستهلكات

‏1-‏ ‏ ‏Hardware‏ ويتضمن :-‏ • Mini API‏ والذي يتكون من:-‏ أ‌-‏ ‏ الكومبيوتر.‏ ب‌-‏ ‏ الشاشة.‏ ت‌-‏ ‏ الطابعة.‏ ث‌-‏ ‏ لوحة المفاتيح.‏ ج‌-‏ Strip reader ‎‏.‏

‏* الـ ‏Densimat‏:- وهو يستخدم لقياس كثافة المحلول البكتيري (‏Allow to adjust thedensity of the bacterial suspensions‏) وحدة قياس كثافة ‏البكتريا في المحلول تسمى (‏Mef‏) ‏Mac Farland‏.‏ ‏* ‏Elctronic Pipette‏ الماصة الإلكترونية.‏

‏2-‏ ‏ ‏Software‏ وله عدة وظائف منها :‏ • ترجمة أو تفسير المعلومات والنتائج ‏ • تخزين النتائج على الـ ‏hard disk ‎‏.‏ • طباعة النتائج.‏

‏3-‏ ‏ المستهلكات (‏The consumable‏) وتتكون من :‏ a‏.‏ الـ ‏strips b‏.‏ اوراق الطباعة c‏.‏ الـ ‏pipette tips

نظام الـ ‏API‏ يقوم بنوعين من القراءة ‏ ‏1-‏ ‏ الـ ‏Colorimetric Readin‏: تعتمد قراءة النتائج على التغيرات اللونية لمحتويات هذه ‏الحجرات. مثال : ‏ID32E‏ ‏ ‏* حيث تقيس هذه الطريقة نفاذية الضوء لكل حجرة وذلك باستخدام 4 فلاتر: برتقالي، بنفسجي، ازرق ‏، اخضر.‏ ‏* وتتم القراءة في 4 خطوات (‏‎ 2Entry + 2exit‎‏).‏

‏2-‏ ‎ Turbidine phelometric reading ‎‏: مثال:‏ID32 GN Turbidimetry: measurement of the intensity of transmitted light (T) which is ‎inversely proportional to the amount of bacteria growth.‎

وهو يعني قياس الضوء الداخل إلى العينة ويتناسب عكسياً مع كمية النمو البكتيري(كثافة البكتريا).‏

Nephelometry: measurement of the intensity of light scattered (S) which is ‎directly proportional to the amount of bacteria growth.‎ ‎ ‎ وهو يعني قياس شدة الضوء المتشتت ويتناسب طردياً مع كمية النمو البكتيري(كثافة البكتريا). وتتم ‏القراءة في خطوتين (‏‎ 1 entry +1exit‎‏).‏

طريقة العمل باستخدام هذا النظام:-‏ اولاً- نبدأ عادة بتصنيف البكتريا بعمل صبغة غرام للتأكد من نوع البكتريا في ما إذا كانت موجبة أو ‏سالبة لصبغة غرام وهذه الخطوة الأولى في عملية التصنيف بشكل عام وكذلك هي إحدى شروط ‏استخدام هذا النظام.‏

‎* ‎صبغة جرام:‏ ‏ صبغة جرام صبغة تفريقية، وتعتبر من أهم طرق الصبغ استعمالاً في البكتريولوجي.وباستعمال ‏هذه الطريقة يمكن تقسيم البكتريا إلى مجموعتين(موجبة لصبغة كرام وسالبة لصبغة كرام) ويعتقد ان ‏سبب الاختلافات في الصبغ بين هذين النوعيين من الخلايا يعود إلى الاختلافات الموجودة في طبيعة ‏وتركيب جدار هذه الخلايا، حيث نجد ان جدار البكتريا الموجبة لصبغة جرام يتكون أساساً من طبقة ‏سميكة من الببتيدوجلايكن، بينما نجد ان جدار البكتريا السالبة لصبغة جرام يتركب من عدة طبقات طبقة ‏رقيقة من الببتيدوجلايكن محاطة بطبقات خارجية من البروتين واللبيدات وعديدة السكريات. وان ‏الاختلاف بين نوعي البكتريا في درجة نفاذية هذه التركيبات السطحية للمحاليل المستعملة في صبغة ‏جرام هو الذي يسبب التفرقة في الصبغ.‏

تحتاج صبغة جرام إلى اربعة محاليل مختلفة هي:-‏ أ‌-‏ ‏ صبغة قاعدية (الصبغة الأساسية) الكرستال البنفسجي.‏ ب‌-‏ ‏ مرسخ (محلول اليود).‏ ت‌-‏ ‏ عامل مزيل اللون(كحول).‏ ث‌-‏ ‏ صبغة مضادة(صبغة ثانية) السيفرانين.‏

‏1-‏ الصبغة الأساسية :- تستخدم لإعطاء الخلايا لوناً مميزاً (اللون البنفسجي).‏ ‏2-‏ اما المرسخ فهو عبارة عن مادة تزيد الجذب بين الخلية والصبغة وباستعمال المادة المرسخة فان ‏الخلية تصبغ بقوة.‏ ‏3-‏ العامل مزيل اللون :- وهو عبارة عن مادة تزيل الصبغة من الخلية المصبوغة. بعض الخلايا ‏المصبوغة تزول صبغتها بسهولة أكثر من الخلايا الأخرى.وفي صبغة جرام فان التفرقة بين ‏أنواع البكتريا تعود إلى الاختلافات في سرعة ازالة الصبغة بين تلك الأنواع.‏ ‏4-‏ الصبغة المضادة (الصبغة الثانية) :- هي صبغة تختلف في لونها عن لون الصبغة الأساسية ‏المستعملة، والغرض من استعمال الصبغة المضادة هو إعطاء الخلايا التي ازيلت منها الصبغة ‏الأساسية لوناً يختلف عن لون الصبغة الأساسية.وهذا يعني ان الخلايا التي لم تزال منها الصبغة ‏الأساسية، تحتفظ بلون الصبغة الأساسية (اللون البنفسجي) وتسمى موجبة جرام اما الخلايا التي ‏ازيلت منها الصبغة الأساسية فإنها تاخذ لون الصبغة المضادة (اللون الاحمر) وتسمى سالبة ‏جرام.‏ ‎* ‎محاليل صبغة جرام يمكن الحصول عليها على شكل عبوات مجهزة تجارياً، وإذا لم يكن بالمستطاع ‏الحصول عليها فيمكن تحضيرها في المختبر كما يلي:-‏ ‏-‏ الصبغة الأساسية (الكريستال البنفسجي):يذاب 2غ من الكريستال البنفسجي في 20 مل من (‏الكحول الاثيلي بتركيز 95%) ونذيب 0,8 غم من اوكسلات الامونيوم‎.H2O‎‏ ‏C2O4‎‏2‏‎ (NH4)‎‏ ‏في 80 مل من الماء، ثم نخلط المحلولين السابقين مع بعضهما. ويترك المزيج لمدة 24 ساعة قبل ‏الاستعمال، ثم يرشح المحلول ويوضع في عبوة خاصة.‏ ‏-‏ مرسخ (محلول اليود): نطحن 1 غم من بلورات اليود و2غم من يوديد البوتاسيومKI)‎‏) مع إضافة ‏بعض المليلترات من الماء ونستمر بالطحن حتى يصبح المحلول جاهزاً، ثم نضيف إلى المحلول ‏الماء المتبقي (مجموع الماء المضاف)300 مل.‏ ‏-‏ عامل مزيل اللون(كحول) :-تخلط احجام متساوية من الكحول الاثيلي (95%) والاسيتون.‏ ‏-‏ صبغة مضادة السفرانين:- تذوب 2,5 غم من صبغة السفرانين في 100 مل من الكحول الاثيلي ‏‏(95%)، ثم تضاف 10 مل من المحلول السابق و100مل من الماء.‏

طريقة العمل(الصبغ) :-‏ تستعمل مزارع حديثة العمر عمرها 18-24 ساعة، لان مثل هذه المزارع تحتفظ خلال العمر المشار ‏اليه بخواص تراكيب جدار الخلية.اما المزارع القديمة فإنها تميل إلى فقدان خاصية الصبغ الموجب ‏الجرام.‏ ‏1-‏ ناخذ مسحة خفيفة من البكتريا التي نريد صبغتها ونضعها في شريحة نظيفة.‏ ‏2-‏ نضيف قطرة واحدة من الماء باستخدام القطرات.‏ ‏3-‏ بواسطة اللوب نمزج العينة مع الماء بشكل جيد ثم نقوم بالفرش حتى نصف مساحة الشريحة ‏تقريباً.‏ ‏4-‏ ندعها تجف في الهواء ثم نثبتها بواسطة لهب بنزن، المسحة جاهزة للصبغ.‏ ‏5-‏ نغمر المسحة بمحلول الكريستال البنفسجي لمدة دقيقة واحدة ثم نغسلها بالماء. ‏ ‏6-‏ نغمر المسحة بمحلول اليود لمدة دقيقة واحدة، ثم نغسلها بالماء.‏ ‏7-‏ نضيف الكحول حتى يختفي اللون لمدة 15-30 ثانية وذلك حسب كثافة المسحة، ثم نغسلها ‏بالماء.‏ ‏8-‏ نغمر المسحة بصبغة السفرانين لمدة 30 ثانية، ثم نغسلها بالماء.‏ ‏9-‏ نجعل الشريحة تجف، ثم تقرأ.‏ ‏* البكتريا الموجبة لصبغة كرام تظهر بلون بنفسجي فاتح.‏ ‏ * البكتريا السالبة لصبغة كرام تظهر بلون احمر.‏

ثانياً- اختيار الشريط المناسب:-‏ لناخذ على سبيل المثال السالمونيلا، فهي تنتمي إلى عائلة الامعائيات (‏Enterobacteriaccae‏) وبالتالي ‏فان الشريط المناسب لها هو ‏ID32E ‎‏.‏

ملاحظة :- عادة ما يرفق جدول خاص يبين أنواع البكتريا المختلفة والطريقة المناسبة لكل نوع.‏

المواد التي يجب توفرها:-‏ a‏.‏ محلول كلوريد الصوديوم ذو التركيز ‏‎0.85% ‎‏.‏ b‏.‏ زيت معدني معقم.‏ c‏.‏ الشريط المناسب لمجموعة البكتريا المراد فحصها ‏strip‏ (شريط)‏‎ ID32E‏.‏ d‏.‏ ‏ الماصة الإلكترونية.‏ e‏.‏ جهاز مقياس الكثافة ‏Densimat‏(لقياس كثافة المحلول البكتيري).‏ f‏.‏ جهاز الـ‎ mini API‏.‏ ثالثاً- خطوات العمل:-‏ أ‌-‏ ‏ تؤخذ مستعمرة أو مستعمرات متشابهة من النمو البكتيري المراد فحصه، ونظيفه إلى محلول ‏كلوريد الصوديوم‎ 0.85% ‎ونمزجه حتى يتجانس، ثم نقيس كثافة المحلول البكتيري باستخدام ‏جهاز مقياس الكثافة ‏‎ Densimat، وفي هذه الحالة يجب أن يساوي ‏‎0.5‎‏ مكفارلند (‏Mac ‎Farland (McF‎‏.‏ ب‌-‏ ناخذ الشريطstrip ‎‏ ‏ID32E‏ وهو يحتوي على 23 حجرة وكل حجرة تمثل فحصاً حيوياً ‏كيميائياً، ونضيف إلى كل حجرة ‏‎55‎‏ ميكروليتر باستخدام الماصة الإلكترونية.‏ ت‌-‏ بعض الحجرات يجب أن تضاف لها قطرتان من الزيت المعدني وذلك لتوفير جو لا هوائي.‏ ث‌-‏ نضع الغطاء على الشريط (‏strip‏).‏ • يوضع الشريط (‏strip‏) في الحاضنة على درجة حرارة 37 م5 لمدة 24 ساعة. بعض الحاضنات ‏تسبب جفاف الوسط الغذائي في الحجرات وللتخلص من هذه المشكلة فإننا نضع الشريط (‏strip‏) في ‏وعاء يحتوي على كمية من الماء، ثم نغلفه، وبهذه الطريقة نستطيع توفير وسط رطب.‏ • بعد مرور 24 ساعة نقرأ العينة، اما قراءة اوتوماتيكية باستخدام جهاز الـ (‏‎ MINI API‏) أو ‏نستطيع قراءة النتيجة بالاعتماد على جدول خاص يسمى جدول القراءة حيث يبين لون كل حجرة إذا ‏كانت النتيجة سلبية أو ايجابية، وتسجل النتائج على اوراق خاصة.‏